一、考研題 微生物 請高人幫忙 先謝了 有一段已知序列的小分子抗菌肽，論述如何采用生物工程的技術進行表達?

這是一道論述題，我自己按照我的理解給你回答一下吧，希望能夠給你一些幫助

首先要知道抗菌肽的表達系統(tǒng)是真核的還是原核的，答題的思路是：

1、利用genbank搜索已知序列，如果沒有則需要自行測序

2、分別測出N端和C端個15個氨基酸序列，利用密碼子簡并性和偏愛性設計引物

3、引物設計出來以后抽提總RNA，用RT-PCR對抗菌肽對應的基因進行擴增。

4、測序，將目的基因連接到T載體上，轉化入克隆菌（如TG1），藍白斑篩選，用PCR和酶切鑒定重組結果，獲得重組質粒后，以此為模板進行測序，驗證目的基因的準確性。

5、選擇適合的表達系統(tǒng)和適合的載體?？刹捎么竽c桿菌原核表達系統(tǒng)，將目的基因從與T載體的重組質粒上進行雙酶切后連接到適合的載體（如pET28a）上，轉化入克隆菌（如TG1）并大量克隆，用酶切和PCR鑒定重組結果。也可采用真核表達系統(tǒng)，若改小分子抗菌肽是真核表達的蛋白，易糖基化、易翻譯后修飾，則用原核表達系統(tǒng)難以表達天然產(chǎn)物結構功能相似的蛋白。故采用真核表達系統(tǒng)。通過位點特異的轉座可方便地將外源基因插入到病毒穿梭載體上，然后提取含有外源基因的重組DNA，將其轉染昆蟲細胞即可獲得含有外源基因的重組病毒用于表達目的蛋白。

6、產(chǎn)物的表達、分離和純化。原核表達系統(tǒng)，是將重組質粒轉化到合適的大腸桿菌表達菌（如BL21、BL21*等）中，加IPTG誘導劑進行誘導表達，經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定表達產(chǎn)物后，通過超聲誘導菌，將上清和沉淀分別進行SDS-PAGE電泳，確定蛋白是上清蛋白還是包涵體，之后根據(jù)蛋白表達的方式可采取相應的方法進行目的蛋白的分離和純化。也可利用含有外源基因的家蠶桿狀病毒感染家蠶幼蟲或蛹進行真核表達，表達的蛋白具有天然活性。

7、確定活性一致。使用免疫學手段，給成年新西蘭兔多次皮下注射乳化好的純化后蛋白，獲得相應抗體，用Western blot和Elisa的方法，目的蛋白和抗體會發(fā)生特異性結合，并用Elisa檢測抗體的效價，以此確定活性一致。

以上純手打，希望能給你一些幫助。

二、選擇專業(yè)與就業(yè)

面對現(xiàn)實，不說大道理,自己的前途，自己來把握

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當我們追求理想時，當然不能忽略了實際問題。 最完美的是能將理想和實際相結合，

找一份你最愛的工作。 當理想和實際有分歧時，你要分三步走。

1）面對現(xiàn)實，只要能得溫飽，有了一定的收入，你能從中得到物質的享受

2) 從實際出發(fā)，做你不是最喜愛的工作。把不愛做的工作做得“足夠好”，然后再說去追逐什么理想。

3）逐步實現(xiàn)理想，做你不是最愛的工作，而在你不愛的工作上拚命，

賺夠了錢，解決了吃飯的問題，再去做你最愛的工作。 。。。

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理想與實際是可以兼得的。但是你必須有計劃，必須付出，必須執(zhí)著。

?三百六十行，行行出狀元，所以不能說什么工作好什么工作不好。

許多做出成就的人其實都是從小事做起，兢兢業(yè)業(yè)，然后才取得成功的。

一個工作只要你喜歡，而且這個工作又特別適合你，能最大限度地發(fā)揮你的長處，

那么，這就是個好工作。我不太贊成找不到工作就不就業(yè)的做法。在就業(yè)的同時能實現(xiàn)擇業(yè)當然好，

但是，在就業(yè)形勢比較嚴峻的形勢下，很難在就業(yè)的同時實現(xiàn)擇業(yè)。

在這種情況下，先就業(yè)后擇業(yè)未必就不是一件好事，在這個過程中你會發(fā)現(xiàn)自己積累了好多社會經(jīng)驗，

積累了許多職業(yè)技能，而現(xiàn)在企業(yè)越來越看中經(jīng)驗。所以先積累經(jīng)驗，

這也有助于你以后找到更為理想的工作。 打工,實踐,積蓄,有一定條件后自己發(fā)展。

應該說哪一行都不好做，只要努力哪一行都能做好！

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祝你成功！

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三、大連理工怎么樣??？有什么強勢學科

?？蒲泄ぷ骶哂休^強實力，有 1 個國家干部培訓基地（中國大連高級經(jīng)理學院）， 4 個國家重點實驗室（海岸及近海工程國家重點實驗室、三束材料改性國家重點實驗室、精細化工國家重點實驗室、工業(yè)裝備結構分析國家重點實驗室）， 1 個國家工程研究中心（船舶制造國家工程研究中心）， 1 個國家大學科技園（大連理工大學 -- 七賢嶺國家大學科技園）， 1 個國家級技術轉移中心（大連理工大學技術轉移中心）， 1 個國家級技術中心（國家振動與強度測試中心）， 2 個教育部重點實驗室（精密與特種加工實驗室、工業(yè)生態(tài)與環(huán)境工程）， 5 個省級重點實驗室（遼寧省微納米技術及系統(tǒng)重點實驗室、遼寧省內燃機重點實驗室、遼寧省工業(yè)設備先進控制系統(tǒng)重點實驗室、遼寧省生物基化學品重點實驗室、制造管理信息化重點實驗室）， 3 個教育部工程（技術）研究中心（教育部模塑制品工程研究中心、教育部制造管理技術工程研究中心、教育部動物性食品安全保障技術工程研究中心）， 6 個遼寧省工程（技術）研究中心（遼寧省精細化工工程研究中心、遼寧省先進裝備設計與 CAE 軟件工程研究中心、遼寧省電子政務工程研究中心、遼寧省先進船舶技術工程技術研究中心、遼寧省高性能樹脂工程技術研究中心、遼寧省工業(yè)生態(tài)與環(huán)境工程技術研究中心），7個國家級企業(yè)技術中心大連理工大學分中心， 2 個國家培訓中心（中國微電子技術應用開發(fā)培訓中心、大連 ITU互聯(lián)網(wǎng)培訓中心）， 3 個國家級教育、教學基地（國家工科化學教學基地、國家大學生文化素質教育基地、國家集成電路人才培養(yǎng)基地）， 2 個國家級實驗教學示范中心（基礎化學實驗中心、工程訓練中心），7個省級實驗教學示范中心（基礎化學實驗中心、基礎物理實驗中心、電工電子實驗中心、工程訓練中心、生物與環(huán)境實驗中心、信息技術實驗中心、水利學實驗中心）， 6 個遼寧省示范性專業(yè)， 4 個遼寧省骨干教師培訓基地， 2 個研究基地（遼寧省“三個代表”重要思想研究基地、遼寧省高校“科技倫理與科技管理”研究基地）， 13 個省級高校重點實驗室， 3 個省級高校工程研究中心（先進船舶工程技術研究中心、先進裝備設計與 CAE 軟件工程研究中心、工業(yè)生態(tài)與環(huán)境工程技術研究中心）， 2 個大連市社會科學重點研究基地， 3 個市級研發(fā)機構， 2 個校企合作研究院（沈鼔－大工研究院、遼油－大工研究院）， 4 個世界銀行貸款、高等教育發(fā)展項目建設的教學實驗中心（工程訓練中心、基礎物理實驗中心、電工電子實驗中心、基礎力學實驗中心）， 69 個獨立的研究中心、研究院（室）， 73 個研究所。 2001 年以來，學校共獲國家級教學、科技獎勵 27 項，省部級科技獎勵 151 項。