組織培養(yǎng)技術(shù) 1．培養(yǎng)程序和培養(yǎng)基 5--6月于晴天的下午在健壯、無(wú)病的草莓剛抽出的匍匐莖上取莖尖，大小為0．3--0．4mm，作為組織培養(yǎng)的外植體。

用于草莓莖尖培養(yǎng)誘導(dǎo)芽分化的基本培養(yǎng)基為MS，附加6--BA0．5mg/L，NAA0．2mg/L，蔗糖30g/L，瓊脂粉6．5g／L，pH值調(diào)至5．8--6．0。在草莓莖尖的擴(kuò)大繁殖階段，采用MS培養(yǎng)基附加6-BA0．5mg/L、NAA0．01mg/L。擴(kuò)大繁殖主要是將叢生苗分塊即每5--7株切成一塊，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基。在轉(zhuǎn)苗過(guò)程中，去掉原生葉片有利于新苗分化，在擴(kuò)大繁殖中隨時(shí)清除愈傷組織，有利于新苗增殖和生長(zhǎng)。誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基用1／2MS附加不同濃度IBA。試驗(yàn)表明：以IBA0．1mg/L的濃度處理的生根率最高，為100％，平均根條數(shù)為2．4條。不加IBA及IBA濃度超過(guò)0．2mg/L，多數(shù)苗都是先于苗基切口處產(chǎn)生愈傷組織，隨后在愈傷組織上分化生根，致使成活率大大降低。2．操作技術(shù)要點(diǎn)及培養(yǎng)條件 (1)滅菌與接種 預(yù)處理 為了滅菌徹底，常把接種材料先進(jìn)行濕潤(rùn)處理，使滅菌劑能順利地滲入材料?？捎枚喾N濕潤(rùn)劑，我們采用的是75％的酒精，濕潤(rùn)的時(shí)間為半分鐘至1分鐘。滅菌處理 在草莓組織培養(yǎng)中常用滅菌劑的種類(lèi)很多。我們?cè)眠^(guò)次氯酸鈉10％水溶液(含有效氯0．4--0．5％)，浸泡接種材料10--15分鐘；次氯酸鈣(漂白粉)，用其飽和上清液，浸泡接種材料15--30分鐘；過(guò)氧化氫10--12％水溶液浸泡10--20分鐘；新潔爾滅5--10％水溶液，浸泡10--15分鐘；升汞0．1％水溶液，浸泡8--10分鐘。其中前4種滅菌劑對(duì)接種材料比較安全，但因滅菌時(shí)間較長(zhǎng)，常常使接種材料的外層氧化變褐，以致影響培養(yǎng)效果。升汞有很強(qiáng)的殺菌能力，但浸泡時(shí)間稍長(zhǎng)會(huì)造成接種材料中毒。因此，在草莓組織培養(yǎng)中，如把握好時(shí)間，升汞是應(yīng)用較多的滅菌劑。滅菌后的接種材料，要用無(wú)菌水充分清洗，通常要換水3--5次。接種 以培養(yǎng)無(wú)病毒苗為主要目的的草莓組織培養(yǎng)，所接種的莖尖材料很小，在接種時(shí)首先要求準(zhǔn)確熟練地剝?nèi)∏o尖生長(zhǎng)點(diǎn)，并使用固體培養(yǎng)基比較適宜，接種時(shí)應(yīng)注意不能將整個(gè)莖尖埋入培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基須用1--1．1大氣壓熱壓滅菌20分鐘。從材料接種到生根苗長(zhǎng)成，這期間的培養(yǎng)溫度一般應(yīng)穩(wěn)定在25±2℃。每日光照12小時(shí)，光強(qiáng)發(fā)2000Lx為宜。培養(yǎng)室溫度在18--26℃范圍內(nèi)，瓶苗可以正常生長(zhǎng)及發(fā)根，但在28℃以上時(shí)，綠苗普遍變黃，生根率降低，根尖發(fā)黃老化，幼苗易產(chǎn)生玻璃化現(xiàn)象。組培苗的移栽技術(shù) 1．移栽技術(shù) 試管苗的苗齡為15天，主根長(zhǎng)1．5cm左右，白色無(wú)須根，移栽成活率可達(dá)90％--100％。移栽前要將培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室中取出置于自然條件下，打開(kāi)瓶蓋進(jìn)行透氣鍛煉。24小時(shí)后，從瓶中取出幼苗，清除干凈根部及根頸處的培養(yǎng)基，栽入苗圃或穴盤(pán)中進(jìn)行馴化?；|(zhì)可采用經(jīng)過(guò)滅菌處理的腐熟的鋸木屑或腐葉土，也可采用經(jīng)過(guò)滅菌處理的由蛭石與珍珠巖按體積計(jì)以1：1比例配成的混合物，或園土與煤渣按體積計(jì)以2：1比例配制成的混合物。2．提高移栽成活率的關(guān)鍵 選擇不定根直接生自莖基，根多且粗壯，葉片在3片以上，葉大、厚、深綠的生根苗，成活率普遍較高。栽培基質(zhì)要用清水沖洗干凈，或用多菌靈或甲基托布津摻拌滅菌，用煤渣作基質(zhì)時(shí)，還要用0．2％冰乙酸中和使堿性降低。移栽時(shí)采取“深栽淺埋”。深栽就是在移栽時(shí)根要栽得深，淺埋的標(biāo)準(zhǔn)是使小苗的根頸與土表平齊，或略高于土表。注意控制光照與溫度、濕度。小苗移栽后，放在溫室內(nèi)或塑料拱棚內(nèi)培養(yǎng)，溫度控制在15--20℃，濕度維持在80％左右為宜。同時(shí)由于剛移栽的小苗莖桿脆嫩，應(yīng)盡量采用噴霧狀澆水，水量也不宜過(guò)大，落干后再?lài)?。遮?0％，一周后，可逐漸增強(qiáng)日光照射。