組織培養(yǎng)的步驟

一、培養(yǎng)基配制

配制培養(yǎng)基有兩種方法可以選擇，一是購買培養(yǎng)基中所有化學藥品，按照需要自己配制；二是購買商品的混合好的培養(yǎng)基基本成分粉劑，如MS、B5等。

自己配制可以節(jié)約費用，但浪費時間、人力、且有時由于藥品的質量問題，給實驗帶來麻煩。就目前國內的情況看，大部分還是自己配制。為了方便起見，現以MS培養(yǎng)基為例介紹配置培養(yǎng)基的主要過程。

1、配制幾種母液

（1）配制MS大量元素母液

一般將大量元素分別配制成100倍的母液，使用時再分別稀釋100倍。

分別稱取

NH4NO3 165g KH2PO4 17g

KNO3 190g CaCl2?2H2O 44g

MgSO4?7H2O 37g

各自配成1L的母液。倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。

（2）配制MS微量元素母液

一般將微量元素配制成100倍母液。

依次稱取

KI 0.083g Na2MoO4?2H2O 0.025g

H3BO3 0.62g CuSO4?5H2O 0.0025g

MnSO4?H2O 1.69g CoCl2?6H2O 0.0025g

ZnSO4?7H2O 0.86g

配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。

CuSO4?5H2O和CoCl2?6H2O 由于稱取量很小，如果天平精確度沒有達到萬分之一，可先配成調整液。

分別稱取

CuSO4?5H2O 0.05g CoCl2?6H2O 0.05g

各自配成100ml的調整液，然后取5ml就還有0.0025g的量。

（3）配制MS有機母液

一般配制成100倍MS有機母液。

依次稱取

肌醇 10g 鹽酸硫胺素（VB1） 0.01g

煙酸 0.05g 甘氨酸 0.2g

鹽酸吡哆醇（VB6） 0.05g

配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。

（4）配制MS鐵鹽母液

一般配制成100倍MS鐵鹽母液。

依次稱取

EDTA二鈉 3.73g FeSO4?7H2O 2.78g

配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。

所以MS母液有5種大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有機母液和MS鐵鹽母液，共8種母液。

激素母液的配制

各種生長素和細胞分裂素要單獨配制，不能混合在一起，生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當量的NaOH溶解，細胞分裂素一般要先用1當量的鹽酸溶解，然后再加蒸餾水定容。一般取100mg配成100ml母液。

2、配制培養(yǎng)基

以配置1L MS培養(yǎng)基為例，按順序進行如下操作：

（1）先在燒杯中放入一些蒸餾水。

（2）分別取上面八種母液10ml倒入。

（3）一般稱取30g蔗糖倒入，攪拌溶解。

（4）加蒸餾水用量筒定溶至1L。

（5）按設計好的方案添加各種激素，由于激素的用量很小，而且激素對組培植物的生長至關重要。所以有條件的話最好用微量可調移液器吸取，減少誤差。

（6）用精密試紙或酸度計調整PH至5.7-5.8。（有條件的話使用酸度計，比較精確） 可配1當量的HCL和1當量的NaOH用來調溶液PH值。

1當量HCL配制：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。

1當量NaOH配制：稱取NaOH 4g 配成100ml溶液。

（7）稱取5g左右瓊脂粉（質量好的瓊脂粉),倒入上面配好的溶液中，放在電爐上加熱至沸騰，直到瓊脂粉熔化。

（8）稍微冷卻后，分裝入培養(yǎng)容器中。無蓋的培養(yǎng)容器要用封口膜或牛皮紙封口，用橡皮筋或繩子扎緊。

（9）放入消毒滅菌鍋滅菌，滅菌20分鐘左右。

（10）滅菌后從滅菌鍋中取出培養(yǎng)基，平放在實驗臺上令其冷卻凝固。

一個完整的植物組織培養(yǎng)過程一般包括以下幾個步驟：

(1)準備階段

查閱相關文獻，根據已成功培養(yǎng)的相近植物資料，結合實際制訂出切實可行的培養(yǎng)方案。然后根據實驗方案配制適當的化學消毒劑以及不同培養(yǎng)階段所需的培養(yǎng)基，并經高壓滅菌或過濾除菌后備用。

(2)外植體選擇與消毒

選擇合適的部位作為外植體，采回后經過適當的預處理，然后進行消毒處理。將消毒后的外植體在無菌條件下切割成一定大小的小塊，或剝離出莖尖，挑出花藥，接種到初代培養(yǎng)基上。(3)初代培養(yǎng)

接種后的材料置于培養(yǎng)室或光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，促使外植體中已分化的細胞脫分化形成愈傷組織，或頂芽、腋芽直接萌發(fā)形成芽。然后將愈傷組織轉移到分化培養(yǎng)基分化成不同的器官原基或形成胚狀體，最后發(fā)育形成再生植株。

(4)繼代培養(yǎng)

分化形成的芽、原球莖數量有限，采用適當的繼代培養(yǎng)基經多次切割轉接。當芽苗繁殖到一定數量后，再將一部分用于壯苗生根，另一部分保存或繼續(xù)擴繁。進行脫毒苗培養(yǎng)的需提前進行病毒檢測。

(5)生根培養(yǎng)

剛形成的芽苗往往比較弱小，多數無根，此時可降低細胞分裂素濃度或不加，提高生長素濃度，促進小苗生根，提高其健壯度。

(6)煉苗移栽

選擇生長健壯的生根苗進行室外煉苗，待苗適應外部環(huán)境后，再移栽到疏松透氣的基質中，注意保溫、保濕、遮蔭，防止病蟲危害。當組培苗完全成活并生長一定大小后，即可移向大田用于生產。

高等植物的組織培養(yǎng)(tissue culture)技術是指分離一個或數個體細胞或植物體的一部分進行培養(yǎng)的技術。

通常我們所說的廣義的組織培養(yǎng)，是指通過無菌操作分離植物體的一部分(即外植體explant)，接種到培養(yǎng)基上，在人工控制的條件進行培養(yǎng)，使其生成完整的植株。

細胞全能性(cell totipotency):植物體的每一個細胞都攜帶有一套完整的基因組，并具有發(fā)育成為完整植株的潛在能力。

植物生長調節(jié)物質對于植物細胞組織的分化和決定具有關鍵性作用。它包括:生長素類、細胞分裂素類、赤霉素、脫落酸、乙烯等。

生長素類主要用于愈傷組織的形成，體細胞胚的產生及試管苗的生根。常用的有2,4-D、NAA(萘乙酸)、IBA(吲哚丁酸)、IAA(吲哚乙酸)等。其作用強弱為2,4-D>NAA>IBA>IAA。

細胞分裂素類則有促進細胞的分裂與分化，延遲組織的衰老，促進芽的產生等作用。常用的有Zip、KT( 氯吡脲)、6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)、ZT(玉米素)等作用強弱順序為。Zip>KT>6-BA>ZT。

赤霉素則有促進已分化的芽伸長生長，打破種子休眠的作用。常用的為GA3。

像這個一般灌植物這方面的東西嗎？大部分他都是不懂的，因為他們只會種一些花花草草的，你可以去咨詢下那些植物專家。