抗原和相應(yīng)的抗體在動物體內(nèi)或體外都能發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，這種反應(yīng)稱為抗原抗體反應(yīng)，習(xí)慣上把體內(nèi)的抗原抗體反應(yīng)稱為免疫反應(yīng)，體外的抗原抗體反應(yīng)稱為血清學(xué)反應(yīng)，因為抗體主要存在于血清中。血清學(xué)反應(yīng)可以用已知的抗體檢查未知的抗原，也可用已知抗原測定未知的抗體。人們根據(jù)抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生反應(yīng)并出現(xiàn)可見的抗原—抗體復(fù)合物的原理，設(shè)計了許多血清學(xué)診斷方法，不僅可以檢測動物體內(nèi)乃至體外的病原微生物，或其抗原性成分，而且還可以測定動物機(jī)體對病原微生物的侵襲或?qū)ζ淇乖煞值拿庖叻磻?yīng)。在抗原—抗體復(fù)合物成不可見狀態(tài)時，可以通過瓊脂擴(kuò)散、凝集實驗以及酶標(biāo)記等指示系統(tǒng)，使其變?yōu)榭梢娀蚩蓽y狀態(tài)。目前已知的血清學(xué)診斷方法很多，現(xiàn)僅介紹幾種在目前條件下規(guī)模化豬場通過學(xué)習(xí)都能做到的診斷方法：（1）凝集試驗豬病診斷過程中常用的操作方法有以下幾種：①全血平板凝集試驗實踐中主要用于細(xì)菌性疾病的抗體檢測和抗原（經(jīng)分離培養(yǎng)后）的鑒定?，F(xiàn)舉例用已知豬丹毒抗原（丹毒桿菌的純培養(yǎng)液）測定被檢豬血清中的抗體。其操作步驟如下：a.材料豬丹毒凝集抗原，玻片，9號針頭，酒精棉球，酒精燈，鉑耳（取血環(huán)）等。b.操作用鉑耳取已知抗原1滴，置于玻片上。用酒精棉球擦拭針頭，鉑耳在酒精燈上灼燒消毒。用針頭刺破被檢豬的耳靜脈，以鉑耳取血與玻片上的抗原等量混合，在2～3分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。c.結(jié)果判定出現(xiàn)顆粒狀的凝集，為陽性反應(yīng)。否則為陰性。②試管凝集試驗是一種定量法，用于測定被檢血清或其他體液中有否某種抗體及其效價，可做臨床的輔助診斷，或用于流行病學(xué)監(jiān)測。在豬場中，本法常用于豬布氏桿菌病的診斷。A.材料布氏桿菌病試管凝集抗原（1∶20倍稀釋），布氏桿菌病陽性血清、陰性血清（1∶25倍稀釋），稀釋液（0.5 %石炭酸生理鹽水），滅菌小試管，1毫升吸管，試管架，待檢血清等。B.操作取試管7支置于試管架上，設(shè)陽性和陰性血清及抗原對照各1支，測定管4支，以后每增加1個樣品，只需增加4支測定管。按表10示意稀釋血清，加抗原，完成后每支試管內(nèi)應(yīng)含1毫升液體。表10 布氏桿菌試管凝集反應(yīng)（單位：毫升）試管號 1 2 3 4 5 6 7血清稀釋倍數(shù) 1∶25 1∶50 1∶100 1∶200 陽性血清對照1∶25 陰性血清對照1∶25 抗原對照0.5%石炭酸生理鹽水 1.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5待檢血清 0.5 0.5 0.5 0.5 抗原（1∶20稀釋） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5棄0.5 棄0.5加入抗原后，將試管充分振蕩，置于37℃溫箱反應(yīng)24小時后，判定結(jié)果。C.判定標(biāo)準(zhǔn)“-” 液體均勻混濁，管底無凝集物，不凝集?！?” 液體透明度較差，管底有少量凝集物，為25%凝集。“++” 液體中等渾濁，管底有中等量的傘狀沉淀，50%菌體凝集?！?++” 液體幾乎透明，管底有明顯傘狀沉淀，75%菌體凝集?！?+++” 液體完全透明，管底出現(xiàn)大片的傘狀沉淀，100%菌體凝集。結(jié)果判定：已出現(xiàn)50%菌體凝集的血清最高稀釋度為該血清的凝集價。在檢測豬布氏桿菌病時，血清凝集價在1∶50以上時，可判為陽性反應(yīng)。若凝集價為1∶25，則為可凝集（需重復(fù)試驗1次）。如豬群中基本無陽性反應(yīng)。則凝集價1∶25也可判為陰性。③間接紅細(xì)胞凝集實驗（簡稱間接血凝試驗）該試驗?zāi)艽蟠筇岣叻磻?yīng)的敏感性。用抗體致敏紅細(xì)胞檢測相應(yīng)的抗原，稱為反向間接血凝試驗；反之，稱為正向間接血凝實驗。在豬病的診斷中，常采用本法對豬口蹄疫、水泡病、豬瘟、傳染性胸膜肺炎等疾病抗原的鑒定，或抗體的檢測?，F(xiàn)舉例豬口蹄疫的抗體檢測（正向間接血凝），操作步驟如下：A.目的檢測被檢血清樣品中豬口蹄疫抗體的效價。B.材料豬口蹄疫（O型）正向間接血凝標(biāo)準(zhǔn)致敏紅細(xì)胞（由蘭州獸醫(yī)研究所提供），標(biāo)準(zhǔn)陽性陰性血清，稀釋液，96孔“V”形有機(jī)玻璃微量血凝板，微量加樣器，滴頭，被檢血清等。C.操作將待檢血清置60℃水浴中滅活30分鐘，用微量加樣器對血凝板上的每孔加入25微升稀釋液，取25微升待檢血清加到第一孔，用加樣器以吸入與排出的動作混合3～4次，取出25微升放入第二孔混勻，依次到第九孔，取出25微升棄掉。血清稀釋度從第一到第九孔分別為1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256，1∶512（第一排的10～12孔設(shè)陽性血清對照、陰性血清對照和抗原對照）。每孔加入25微升致敏紅細(xì)胞，振蕩1～2分鐘，置37℃溫箱或室1～2小時或更長時間，然后判定結(jié)果。D.判定標(biāo)準(zhǔn)“-” 紅細(xì)胞沉底，呈圓點(diǎn)狀，不凝集?！?” 紅細(xì)胞大部分集中于中央，周圍只有少數(shù)凝集，即25%凝集。“++” 紅細(xì)胞呈薄層凝集，中心致密，邊緣分散，即50%凝集?！?++” 紅細(xì)胞凝集程度較上有所增加，即75%凝集。“++++” 紅細(xì)胞呈薄層凝集，布滿整個孔底或邊緣，蜷曲呈荷包蛋邊狀，即100%凝集。結(jié)果判定：以出現(xiàn)50%凝集（++）的血清最高稀釋度，為該血清的間接血凝價。④血凝（HA）與血凝抑制（HI）試驗在豬的傳染病中，細(xì)小病毒感染、乙型腦炎、偽狂犬病等，適宜進(jìn)行血凝和血抑試驗，本試驗以檢測豬細(xì)小病毒血清抗體為例，介紹如下：A.材料豬細(xì)小病毒濃縮診斷抗原，豚鼠沉積紅細(xì)胞配成的0.5%懸液。稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)陽性和陰性血清、被檢血清、96孔V形有機(jī)玻璃微量血凝板、25～50微升微量移液管、微量振蕩器、普通離心機(jī)等。B.試驗方法a.血凝（HA）試驗用滴管在96孔血凝板上以第一孔至試驗所需要稀釋倍數(shù)孔，每孔滴加稀釋液25微升，用移液器從第一孔開始依次稀釋，置微量振蕩器上振蕩15秒，最后每孔滴加0.5%豚鼠紅細(xì)胞25微升，振蕩30分鐘，置室溫（20℃左右）1小時后判定。b.血凝抑制（HI）試驗被檢豬血清先經(jīng)56℃、30分鐘滅活，然后加入50%豚鼠紅細(xì)胞（最終濃度）和等量的高嶺土，搖勻后放室溫15分鐘，經(jīng)2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液以除掉血清中非特異性的凝集素和抑制素，然后用稀釋液將每份處理過的血清1∶5～1∶10至240倍比稀釋，在向每孔加入等量4個血凝單位的標(biāo)準(zhǔn)血凝素（抗原），混勻后置室溫1小時，加入新配制的0.5%豚鼠紅細(xì)胞懸液，混勻后置室溫2小時，判定結(jié)果，同時設(shè)陽性、陰性血清及紅細(xì)胞和抗原的對照，HI抗體滴度≥1∶20者為陽性，豬感染PPV后7天左右可檢出HI抗體，12～14天可達(dá)1∶1024～5000。⑤乳膠凝集試驗（LAT）本法在豬病中主要作用于偽狂犬病和豬萎縮性鼻炎的診斷，是用其病毒或細(xì)菌致敏乳膠抗原來檢測被檢豬的血清、全血或乳汁中的抗體，具有簡便、快速、特異、敏感的優(yōu)點(diǎn)。A.材料偽狂犬病毒致敏乳膠抗原，偽狂犬病陽性血清、陰性血清、稀釋液，玻片，吸頭，被檢血清或全血或乳汁（通常采初乳，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分鐘離心，取上清液做待檢樣品）。B.試驗方法a.定性試驗取被測樣品（血清，全血或乳汁）、陽性血清、陰性血清、稀釋液各1滴，分置于玻片上，各加乳膠抗原1滴，用牙簽混勻，攪拌并搖動1～2分鐘，于3～5分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。b.定量試驗先將血清在微量反應(yīng)板或小試管內(nèi)作連續(xù)倍比稀釋，各取1滴依次滴加于乳膠凝集反應(yīng)板上，另設(shè)對照（同上），隨后各加乳膠抗原1滴。如上攪拌并搖動，然后判定。C.結(jié)果判定首先對照組要出現(xiàn)如下結(jié)果，本試驗才能成立：陽性血清加抗原呈“++++”，陰性血清加抗原呈“-”，抗原加稀釋液呈“-”。“++++”全部乳膠凝集，顆粒聚集于液滴邊緣，液體完全透明。“+++”大部分乳膠凝集，但顆粒明顯，液體稍混濁?！?+”約50%乳膠凝集，但顆粒較細(xì)，液體較混濁?！?”僅有少許凝集，液體混濁?！?”液滴呈原有的均勻乳狀。以出現(xiàn)“++”以上凝集者，判為陽性凝集。注意事項：試劑盒應(yīng)在2～8℃冷暗處保存，暫定1年。乳膠抗原為乳白色狀液體，如出現(xiàn)分層，使用前輕輕搖勻。（2）沉淀實驗具體方法有多種，如環(huán)狀沉淀實驗、瓊脂擴(kuò)散實驗和免疫電泳等。在豬病的診斷中，目前最常用的是瓊脂擴(kuò)散實驗，現(xiàn)以檢測偽狂犬病的抗體為例，將其操作方法介紹如下：A.材料偽狂犬病標(biāo)準(zhǔn)抗原，陽性血清，陰性血清，待檢血清（56℃滅能30分鐘），生理鹽水，打孔器，微量移液器，培養(yǎng)皿，瓊擴(kuò)瓊脂（配制方法：含有0.1%石炭酸的磷酸緩沖鹽水，加入1%的優(yōu)質(zhì)瓊脂，在沸水中融化均勻，若有雜質(zhì)，須用紗布過濾，然后分裝于鹽水瓶內(nèi)，保存?zhèn)溆茫?。B.操作a.澆瓊脂板和打孔將已融化的瓊脂趁熱倒入平皿，制成3毫米厚的瓊脂板，待凝固后進(jìn)行打孔。一組共7個孔，中間1孔，孔徑4毫米，孔距3毫米。用打孔器打孔，剔出孔內(nèi)的瓊脂然后將瓊脂板在酒精燈上來回過2～3次，使瓊脂與玻板之間的空隙封閉。b.向孔內(nèi)加樣中央孔加抗原，外周孔第1，5孔加陽性和陰性血清作對照，第2，3，4，6孔加待檢血清。將加完樣的瓊脂平皿加上蓋子，置37℃恒溫箱擴(kuò)散24～36個小時，然后判定結(jié)果。C.結(jié)果判定首先檢查標(biāo)準(zhǔn)陽性血清孔和抗原孔之間是否出現(xiàn)明顯的致密的白色沉淀線，而陰性孔則不出現(xiàn)，只有在對照組出現(xiàn)正確結(jié)果的前提下，被檢孔才可參照標(biāo)準(zhǔn)判定。注意事項：第一，瓊擴(kuò)所用的瓊脂必須是優(yōu)質(zhì)的瓊脂粉，若用普通的瓊脂條，應(yīng)事先凈化精制。精制的簡易方法是：取條狀瓊脂24克，加蒸餾水1000毫升，在沸水中融化，趁熱倒入搪瓷盤中，待冷卻后切成1平方厘米大小的瓊脂塊，用蒸餾水或無離子水浸泡2～3天，每天換水4～5次，然后將處理好的瓊脂塊隔水融化，加入0.1%石炭酸磷酸緩沖鹽水，配成1%瓊脂。第二，制備瓊脂板應(yīng)在水平臺上進(jìn)行，防止薄厚不勻。板的厚度要求一致（7.5厘米的平皿，用15毫升瓊脂液）。澆制時防止產(chǎn)生氣泡。平皿澆制的瓊脂板在4℃冰箱內(nèi)可保存15天。第三，打孔的孔徑、孔距力求準(zhǔn)確、合適。第四，孔中滴加抗原和血清時，孔內(nèi)必須加滿而又不能外溢。加樣時不能帶進(jìn)小氣泡。（3）酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）它是根據(jù)抗原與抗體特異性結(jié)合的功能，以酶做標(biāo)記物，利用酶對底物具有高效催化作用的原理而設(shè)計的。它既可以用于抗原的診斷，也可進(jìn)行血清抗體的檢測，可達(dá)到定性和定量的目的。已廣泛地用于傳染性疾病的診斷，血清流行病學(xué)調(diào)查和抗體水平的評價等。目前在獸醫(yī)防治的研究和實踐中，對于豬瘟、偽狂犬病、繁殖障礙與呼吸綜合征、流行性腹瀉、旋毛蟲病、豬氣喘病等疾病，均采用免疫酶技術(shù)進(jìn)行病原診斷、抗體檢測和血清學(xué)流行性調(diào)查，并且已成為規(guī)模化豬場化驗室工作的一項重要內(nèi)容。利用免疫酶技術(shù)測定抗原和抗體的方法很多，下面簡要介紹3種適合豬場使用的免疫酶技術(shù)。①斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附實驗（Dot—ELISA）A.材料硝酸纖維濾膜（孔徑0.45微米），0.01摩/升、pH7.2的磷酸鹽緩沖鹽水，封閉液（磷酸鹽緩沖鹽水加入10%馬血清或0.1%明膠），30%雙氧水（H2O2），3，3′-二甲基聯(lián)苯胺（DAB）抗原液，陰性對照，待檢液，待檢血清，陽性血清及陰性血清，酶標(biāo)兔抗豬免疫球蛋白G（IgG），0.05摩/升三羥甲氨基甲烷—鹽酸緩沖液，洗滌液（磷酸鹽緩沖鹽水加入0.05%吐溫-20）。B.檢測抗原操作第一，硝酸纖維薄膜（NCM）的處理：在濾膜上劃6毫米×6毫米的方格，在方格中央用蘸水筆末端壓成圓形痕跡。置于蒸餾水中浸泡10分鐘，取出后晾干備用。第二，點(diǎn)樣：取1毫升待檢液在硝酸纖維濾膜圓圈內(nèi)點(diǎn)樣，同時設(shè)立陽性與陰性對照，自然干燥或置于37℃溫箱中干燥。第三，封閉：將硝酸纖維濾膜置于封閉液中，37℃、30分鐘，用洗滌液洗滌1次，約3分鐘。第四，加豬陽性血清，將硝酸纖維薄膜置于豬陽性血清中，37℃作用1小時，取出用洗滌液洗滌3次，每次3分鐘。第五，加酶標(biāo)兔抗豬免疫球蛋白G，37℃作用1小時，然后洗滌3～4次，每次3分鐘。第六，加底物溶液（0.05摩/升三羥甲氨基甲烷—鹽酸緩沖液100毫升，加3，3′-二甲基聯(lián)苯胺40毫克，30%雙氧水50微升），作用5～10分鐘。第七，終止顯色，將硝酸纖維濾膜置于蒸餾水中沖洗2～3分鐘。第八，自然干燥，或37℃下干燥。第九，判定標(biāo)準(zhǔn)：“-” 不呈現(xiàn)斑點(diǎn)，與陰性對照相同?！?” 斑點(diǎn)較弱或沉淀內(nèi)有不均質(zhì)的棕色點(diǎn)?！?+” 斑點(diǎn)淺棕色，對比度清晰?！?++” 介于++和+++兩者之間?！?+++”斑點(diǎn)深棕色，背景白色。出現(xiàn)陽性反應(yīng)的血清最高稀釋度為該血清的Dot—ELISA效價。第十，注意事項：試驗中的點(diǎn)樣抗原、血清及酶標(biāo)抗體的稀釋度，應(yīng)根據(jù)預(yù)備試驗確定；試驗中應(yīng)使用不溶性供氫體；如3，3′-二甲基聯(lián)苯胺，4-氯-1-萘酚等，不能使用可溶性供氫體；根據(jù)試驗的目的要求，確定檢測抗原或抗體；封閉液可使用異種動物血清、牛血清蛋白（BSA）或明膠溶液等進(jìn)行封閉，根據(jù)預(yù)備試驗選擇最佳封閉條件。C.檢測抗體操作第一，硝酸纖維濾膜的處理，同檢測抗原。第二，點(diǎn)樣，取已知抗原液點(diǎn)樣，自然晾干或37℃干燥。第三，封閉，同檢測抗原。第四，將點(diǎn)樣后的硝酸纖維濾膜按點(diǎn)樣格子剪成小塊，置入系列稀釋液的待檢血清（1∶10，1∶50，1∶100，1∶200，1∶400，1∶800，1∶1600，1∶3200，1∶6400，1∶12800）中，同時設(shè)立陽性和陰性血清對照，37℃作用1小時，然后用洗滌液洗滌3次，每次3分鐘。第五，以下均同檢測抗原第六、第七、第八、第九、第十項操作。②酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）現(xiàn)介紹豬病診斷常用的兩種方法：A.間接法將已知抗原吸附（或稱包被）與固相載體，孵育后洗去未吸附的抗原，隨后加入含有特異性抗體的被檢血清，感作后洗滌未起反應(yīng)的物質(zhì)，加入酶標(biāo)抗同種球蛋白（如被檢血清是豬血清，則需用抗豬球蛋白），感作后再經(jīng)洗滌，加入酶底物，底物分解后出現(xiàn)顏色變化，顏色變化的速度及程度，與樣品中的抗體量有關(guān)，即樣品中的抗體愈多，顏色出現(xiàn)愈快、愈深。a.材料0.05摩/升、pH9.6碳酸鹽緩沖液，稀釋液用0.01摩/升、pH7.2磷酸緩沖鹽水（含0.13摩/升氯化鈉，0.5%犢牛血清），洗滌液用0.01摩/升、pH7.2磷酸鹽緩沖鹽水（含0.13摩/升氯化鈉，0.05%吐溫-20），30%雙氧水，鄰苯二胺（OPD），pH5.0磷酸二氫鈉—檸檬酸緩沖液，2摩/升硫酸，抗原，陽性血清，陰性血清，待檢血清，酶標(biāo)兔抗豬免疫球蛋白，40孔聚苯乙烯聯(lián)板，酶聯(lián)免疫檢測儀。b.操作第一，用碳酸鹽緩沖液配置一定濃度的抗原包被液包被酶聯(lián)板，每孔100微升，置37℃條件下2小時，或在4℃冰箱內(nèi)過夜。第二，傾去孔內(nèi)液體，用洗滌液加滿各孔，洗滌3次，每次3分鐘，然后傾盡洗滌液。第三，除調(diào)零孔外，其余孔加入用稀釋液稀釋的待檢血清，每孔100微升，同時設(shè)立陽性、陰性血清對照，置37℃下反應(yīng)1.5小時。第四，抗體效價測定。將待檢血清進(jìn)行血清進(jìn)行倍比稀釋，每份血清加兩排孔，即同一稀釋度的血清加上下相鄰的兩個孔，每孔100微升，凋零孔不加血清。同時設(shè)立陽性、陰性血清對照。置37℃反應(yīng)1.5小時。第五，洗滌同第二。第六，除調(diào)零孔外，每孔加入酶標(biāo)記兔抗豬免疫球蛋白G 100微升，置37℃下反應(yīng)1.5小時。第七，洗滌同第二。第八，每孔加入新配置的底物溶液（取鄰苯二胺40毫克，溶于100毫升pH5.0的磷酸鹽—檸檬酸緩沖液，臨用前加入30%雙氧水0.15毫升）100微升，室溫下觀察顯色（5～30分鐘）。第九，每孔加入50微升，2摩爾/升硫酸終止反應(yīng)。第十，用酶聯(lián)免疫檢測儀測定每孔490納米波長的光密度（OD）值。B.夾心法本法是檢測抗原的方法，將特異性免疫球蛋白吸附于固相載體表面，然后加入含有抗原的溶液，使抗原和抗體在固相表面形成復(fù)合物，洗除多余的抗原，再加入酶標(biāo)記的特異性抗體，感作后沖洗，加入酶的底物，顏色的改變與被測樣品中的抗原量成正比。a.材料同間接法。b.操作（以檢測豬瘟病毒抗原為例）第一，抗體包被：將一定溶度的豬瘟高免血清（用碳酸鹽緩沖液進(jìn)行稀釋）包被酶聯(lián)板，每孔100微升，置37℃下反應(yīng)2小時，或4℃冰箱中過夜。第二，洗滌：同間接法。第三，加被檢樣品，除調(diào)零孔外，每份樣品加2個孔，每孔加100微升，同時設(shè)立陽性抗原、陰性抗原對照，酶結(jié)合物對照（抗體加磷酸鹽緩沖鹽水加酶結(jié)合物），置37℃下反應(yīng)1.5～2小時。第四，洗滌，同第二。第五，加底物溶液，同間接法第八。第六，同間接法第九。第七，同間接法第十。C.結(jié)果判定常用的判定方法有3種。陰陽性表示法：待檢樣本吸收值：規(guī)定吸收值≥0.2～0.4為陽性。規(guī)定吸收值等于陰性樣本平均吸收值加SD（標(biāo)準(zhǔn)差）。陽性陰性比（P/N）法：樣本吸收值/陰性樣本平均吸收值≥2～3者為陽性。終點(diǎn)表示法：以出現(xiàn)陽性反應(yīng)的樣本最高稀釋度，為該樣本的滴度。D.注意事項第一，包被過程中以高pH和低離子強(qiáng)度的條件為佳，包被濃度在1～100毫克/毫升選擇最佳濃度。第二，血清或抗原稀釋液應(yīng)含5%～10%異種動物血清，或1%牛血清白蛋白，或0.5%明膠，以起封閉作用，防止非特異性反應(yīng)，否則應(yīng)在第二與第三步之間加封閉液進(jìn)行封閉。第三，洗滌要充分，酶結(jié)合物應(yīng)按照要求進(jìn)行稀釋和使用，底物溶液一定要現(xiàn)配現(xiàn)用。第四，顯色時陰性對照剛出現(xiàn)微黃色時，應(yīng)立即終止反應(yīng)。第五，用陽性陰性比方法判定結(jié)果時，陰性對照孔若小于0.1，則易出現(xiàn)誤判。第六，用自動酶聯(lián)儀檢測時，應(yīng)按儀器規(guī)定說明確定調(diào)零孔。第七，同一稀釋度2個孔的490納米波長光密度值的平均值，為該稀釋度的光密度值，對照孔應(yīng)作同樣處理。③豬瘟單克隆抗體純化酶聯(lián)免疫吸附試驗A.材料本試驗的試劑盒由中國獸藥監(jiān)察所提供。本抗原包括豬瘟弱毒單抗純化酶聯(lián)抗原和豬瘟強(qiáng)毒單抗純化酶聯(lián)抗原，分別供檢測經(jīng)豬瘟弱毒疫苗免疫后產(chǎn)生的抗體和感染豬瘟強(qiáng)毒后產(chǎn)生的抗體之用。同時提供酶標(biāo)抗體，陽性、陰性血清，酶聯(lián)板及其他器材和試劑。B.試驗方法第一，用包被液將豬瘟弱毒單抗純化酶聯(lián)抗原、豬瘟強(qiáng)毒單抗純化酶聯(lián)抗原各做100倍稀釋，以100微升分別加入做好標(biāo)記的酶聯(lián)板孔中，置濕盒于4℃過夜。第二，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液沖洗板3次，每次間隔3～5分鐘，拍干。第三，用稀釋液將待檢血清作400倍稀釋，每孔加入100微升，同時將豬瘟陽性陰性血清以100倍稀釋作對照，37℃下培育1.5～2小時。第四，重復(fù)第二步。第五，用稀釋液將兔抗豬免疫球蛋白G辣根過氧化物酶結(jié)合物作100倍稀釋，每孔加入100微升，37℃下培育1.5～2小時。第六，重復(fù)第二步。第七，每孔加入底物溶液（每塊板所需的底物溶液按鄰苯二胺5毫克加底物緩沖液5毫升加30%雙氧水18.75微升配制）100微升，室溫下觀察顯色反應(yīng)（一般陰性對照孔略微顯色，立即終止反應(yīng)，并以陰性孔作空白調(diào)零）。第八，每孔加入終止液50微升，于酶聯(lián)讀書儀上測定490納米波長的光密度（OD）。C.判定標(biāo)準(zhǔn)a.在豬瘟弱毒酶聯(lián)板上光密度＞0.2為豬瘟弱毒抗體陽性。光密度＜0.2為豬瘟弱毒抗體陰性。b.在豬瘟強(qiáng)毒酶聯(lián)板上光密度≥0.5為豬瘟強(qiáng)毒抗體陽性。光密度＜0.5為豬瘟強(qiáng)毒抗體陰性。D.注意事項第一，運(yùn)輸單純純化酶聯(lián)抗原時，必須使用冰盒低溫運(yùn)輸。第二，配制洗滌液時，應(yīng)使用新鮮蒸餾水或無離子水；每次洗板后，盡量不使孔中有殘余液體，以免影響結(jié)果。第三，底物溶液臨用前配置，待鄰苯二胺完全溶解于底物緩沖液后再加雙氧水，混勻后立即加入孔中。第四，終止反應(yīng)后，應(yīng)立即讀數(shù)。200.豬場獸醫(yī)檢驗室應(yīng)配備哪些器材和試劑？（1）設(shè)備類：豬場獸醫(yī)檢驗室配備的主要設(shè)備有電冰箱、電熱培養(yǎng)箱、電熱干燥箱、臺式離心機(jī)、超凈工作臺、高壓滅菌鍋、顯微鏡、蒸餾水器、微量血清振蕩器、組織搗碎機(jī)等。（2）器械類：豬場獸醫(yī)檢驗室配備的主要器械有普通天平、研缽、鐵三腳架、酒精燈、石棉網(wǎng)、試管架、接種棒、帶蓋搪瓷盤、鋁飯盒、微量反應(yīng)板（V型）、微量移液器（100微升、250微升）、普通剪刀、眼科剪刀、眼科鑷子、長鑷子、手術(shù)刀等。（3）豬場獸醫(yī)檢驗室配備的主要玻璃器材：有玻璃注射器、試管、刻度吸管、燒杯、三角燒瓶、玻璃漏斗、量筒、玻璃珠、載玻片、蓋玻片等。（4）試劑類：豬場獸醫(yī)檢驗室配備的主要試劑有95%乙醇、氯化鈉、氫氧化鈉、堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫、沙黃、姬姆薩、甲醇、甲醛、草酸銨、甲基紅、營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂、SS瓊脂、三糖鐵瓊脂、微量生化反應(yīng)管、二甲苯、顯微鏡油、擦鏡紙、常用豬病血清學(xué)診斷試劑盒等。附錄：豬的實用生理常數(shù)