如何用組培技術(shù)育苗

role=figure組織培養(yǎng)育苗的過程

（1）能保持原有品種的固有性狀和特性。

（2）節(jié)約繁殖材料。采集一小部分營養(yǎng)器官就能繁殖出大量花苗。

（3）繁殖速度快。從優(yōu)良母株上取一小塊組織，在合適的條件下經(jīng)過離體培養(yǎng)，一年內(nèi)就能繁殖出成千上萬株苗。

（4）節(jié)省土地。組培材料是放在三角瓶或試管內(nèi)培養(yǎng)的，通常一間30平方米的培養(yǎng)室就能擺放1萬多個三角瓶，可以繁殖幾萬株苗。而且周轉(zhuǎn)快，全年均可連續(xù)培養(yǎng)。

（5）去病毒。目前許多花卉病毒病較為嚴重，直接影響觀賞和出口。通過組織培養(yǎng)可以進行脫毒，使之成為無毒的種苗。

（6）復壯品種。對于長期使用無性繁殖，并開始退化的花卉品種，采用組培方法繁殖，可使個體發(fā)育向年輕階段轉(zhuǎn)化。

（7）可進行無性繁殖。對一些生產(chǎn)上難以進行無性繁殖的花木，或者不能進行無性繁殖的花木，在組培的特殊條件下，可以在短期內(nèi)獲得大量營養(yǎng)苗。

植物組織培養(yǎng)的流程

植物組織培養(yǎng)的流程：

第一步，將采來的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細洗干凈，如用適當?shù)乃⒆拥人⑾?。把材料切割成適當大小，即滅菌容器能放入為宜。置自來水龍頭下流水沖洗幾分鐘至數(shù)小時，沖洗時間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細小的材料，可裝入紗布袋內(nèi)沖洗。

流水沖洗在污染嚴重時特別有用。洗時可加入洗衣粉清洗，然后再用自來水沖凈洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表面的污物，除去脂質(zhì)性的物質(zhì)，便于滅菌液的直接接觸。當然，最理想的清洗物質(zhì)是表面活性物質(zhì)―吐溫。

第二步是對材料的表面浸潤滅菌。要在超凈臺或接種箱內(nèi)完成，準備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手表等。用70%酒精浸10～30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸濕的作用，加之70%酒精穿透力強，也很易殺傷植物細胞，所以浸潤時間不能過長。

有一些特殊的材料，如果實、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗，多層鱗片的休眠芽等等，以及主要取用內(nèi)部的材料，則可只用70%酒精處理稍長的時間。處理完的材料在無菌條件下，待酒精蒸發(fā)后再剝除外層，取用內(nèi)部材料。

第三步是用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類較多，可根據(jù)情況選取1～2種使用見表。第四步是用無菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，視采用的消毒液種類，涮洗3～10次左右。

無菌水涮洗作用是免除消毒劑殺傷植物細胞的副作用注意：①酒精滲透性強，幼嫩材料易在酒精中失綠，所以浸泡時間要短，防止酒精殺死植物細胞。②老熟材料，特別是種子等可以在酒精中浸泡時間長一些，如種子可以浸泡5分鐘。③升汞的滲透力弱，一般浸泡10分鐘左右，對植物材料的殺傷力不大。④漂白粉容易導致植物材料失綠，所以對于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入濃度為0.08～0.12%的吐溫20或80（一種濕潤劑），可以降低植物材料表面的張力，達到更好的消毒效果。

擴展資料

培養(yǎng)材料采集：

要根據(jù)培養(yǎng)目的適當選取材料，選擇原則：易于誘導、帶菌少。要選取植物組織內(nèi)部無菌的材料。這一方面要從健壯的植株上取材料，不要取有傷口的或有病蟲的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，決不要在雨天、陰天或露水未干時取材料。因為健壯的植株和晴天光合作用、呼吸作用旺盛的組織，有自身消毒作用，這種組織一般是無菌的。

培養(yǎng)材料的消毒：

從外界或室內(nèi)選取的植物材料，都不同程度地帶有各種微生物。這些污染源一旦帶入培養(yǎng)基，便會造成培養(yǎng)基污染。因此，植物材料必須經(jīng)嚴格的表面滅菌處理，再經(jīng)無菌操作手續(xù)接到培養(yǎng)基上。

參考資料：植物組織培養(yǎng)_百度百科

植物組織培養(yǎng)的流程：

第一步，將采來的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細洗干凈，如用適當?shù)乃⒆拥人⑾?。把材料切割成適當大小，即滅菌容器能放入為宜。置自來水龍頭下流水沖洗幾分鐘至數(shù)小時，沖洗時間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細小的材料，可裝入紗布袋內(nèi)沖洗。

第二步是對材料的表面浸潤滅菌。要在超凈臺或接種箱內(nèi)完成，準備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手表等。用70%酒精浸10～30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸濕的作用，加之70%酒精穿透力強，也很易殺傷植物細胞，所以浸潤時間不能過長。

第三步是用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類較多，可根據(jù)情況選取1～2種使用見表。第四步是用無菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，視采用的消毒液種類，涮洗3～10次左右。

擴展資料

組織培養(yǎng)技術(shù)是在人為創(chuàng)造的無菌條件下將生活的離體器官（如根、莖、葉、莖段、原生質(zhì)體）、組織或細胞置于培養(yǎng)基內(nèi)，并放在適宜的環(huán)境中，進行連續(xù)培養(yǎng)以獲得細胞、組織或個體的技術(shù)。

組織培養(yǎng)技術(shù)原理

植物組織培養(yǎng)的原理是細胞全能性。也就是說每個植物細胞里都含有一整套遺傳物質(zhì)，只不過在特定條件下才會表達。

組織培養(yǎng)基于此原理就可以將已處于分化終端或正在分化的植物組織脫分化，誘導形成愈傷組織，再在愈傷組織上形成新的叢生芽。

組織培養(yǎng)技術(shù)的應用

（1）改良作物：增加遺傳變異性。

（2）繁殖植物：組織培養(yǎng)中從一個單細胞，一塊愈傷組織，一個芽（或其它器官）都可以獲得無性系。無性系就是用植物體細胞繁殖所獲得的后代。

（3）有用化合物：有用化合物包括藥物、橡膠、香精油、色素等。這些化合物許多都是高等植物的次生代謝物，有些化合物還不能大規(guī)模地人工合成，而靠植物產(chǎn)生這些化合物來源有限。因此，利用組織培養(yǎng)方法，培養(yǎng)植物的某些器官或愈傷組織，并篩選出高產(chǎn)、高合成能力、生長快的細胞株系，以進行工業(yè)化生產(chǎn)，是一條行之有效的途徑。

參考資料來源：百度百科：組織培養(yǎng)技術(shù)

植物組織培養(yǎng)可以分為四個階段：

（1）建立無菌體系，即外植體及培養(yǎng)基的消毒、接種，獲得愈傷組織或器官。

（2）進行增殖，不斷分化產(chǎn)生新的植株，或直接產(chǎn)生不定芽及胚狀體，也可以根據(jù)需要反復進行繼代培養(yǎng)，以達到大量繁殖的目的。

（3）將植株轉(zhuǎn)移進行生根培養(yǎng)，可以轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，也可以直接切取進行扦插生根。

（4）試管苗過渡，即試管苗出瓶后進行一定時間對外界環(huán)境的適應過程。

一個完整的植物組織培養(yǎng)過程一般包括以下幾個步驟：

（1）準備階段

查閱相關(guān)文獻，根據(jù)已成功培養(yǎng)的相近植物資料，結(jié)合實際制訂出切實可行的培養(yǎng)方案。然后根據(jù)實驗方案配制適當?shù)幕瘜W消毒劑以及不同培養(yǎng)階段所需的培養(yǎng)基，并經(jīng)高壓滅菌或過濾除菌后備用。

（2）外植體選擇與消毒

選擇合適的部位作為外植體，采回后經(jīng)過適當?shù)念A處理，然后進行消毒處理。將消毒后的外植體在無菌條件下切割成一定大小的小塊，或剝離出莖尖，挑出花藥，接種到初代培養(yǎng)基上。

（3）初代培養(yǎng)

接種后的材料置于培養(yǎng)室或光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，促使外植體中已分化的細胞脫分化形成愈傷組織，或頂芽、腋芽直接萌發(fā)形成芽。然后將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基分化成不同的器官原基或形成胚狀體，最后發(fā)育形成再生植株。

（4）繼代培養(yǎng)

分化形成的芽、原球莖數(shù)量有限，采用適當?shù)睦^代培養(yǎng)基經(jīng)多次切割轉(zhuǎn)接。當芽苗繁殖到一定數(shù)量后，再將一部分用于壯苗生根，另一部分保存或繼續(xù)擴繁。進行脫毒苗培養(yǎng)的需提前進行病毒檢測。

（5）生根培養(yǎng)

剛形成的芽苗往往比較弱小，多數(shù)無根，此時可降低細胞分裂素濃度或不加，提高生長素濃度，促進小苗生根，提高其健壯度。

（6）煉苗移栽

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選擇生長健壯的生根苗進行室外煉苗，待苗適應外部環(huán)境后，再移栽到疏松透氣的基質(zhì)中，注意保溫、保濕、遮蔭，防止病蟲危害。當組培苗完全成活并生長一定大小后，即可移向大田用于生產(chǎn)。

如：莖尖→表面消毒→接種誘導培養(yǎng)基→莖尖生長→病毒檢測鑒定→培養(yǎng)無根小植株→培養(yǎng)生根→完整小植株→煉苗20-25天→移栽成活。?

常規(guī)情況下詳細的生產(chǎn)流程圖如下：

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對不同的品種詞流程會略有差異，如進行果樹育苗還需進行嫁接等操作流程，但對組培工廠化育苗而言，一般可根據(jù)上面的流程圖來安排各項作業(yè)，只有相互銜接好、配合好，才能提高生產(chǎn)效益。

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家庭組織培養(yǎng)

植物的組織培養(yǎng)沒有最基本的條件和物品是搞不成的，當時合理的利用一些最簡單的用具也并非無法辦到。

一、最必需的物品

1、.家用高壓鍋 1個最好大一點的，裝的東西多一點。用于培養(yǎng)基、無菌水等的消毒

2、接種箱 （無菌箱）1個 ，需要自己自制，用一些木板和一塊玻璃和二尺布料。用于接種和轉(zhuǎn)移。

3、藥用天平1架 最好是500g稱量的，小一點也可以，主要用來稱瓊脂、糖等物品。

4、不銹鋼鍋或鋁鍋（煮湯、面條的那種）買。用于煮制培養(yǎng)基用的。

5、攪拌和分裝培養(yǎng)基用的調(diào)羹一個，用于煮制和分裝培養(yǎng)基。

6、培養(yǎng)用的瓶子若干，

7、制棉塞用的棉花、紗布和線若干，用于做瓶口的塞子，要注意的是，棉花要使用普通做棉衣的棉花，不要用醫(yī)院用的脫脂棉，這樣容易穿塞污染。

8、牛皮紙、橡皮圈若干，用于包瓶頭和扎包頭紙用。

9、酒精燈1盞、解剖刀1把，刀片若干、鑷子2把、10ml、100ml量筒各一個，2ml移液管1只、藥棉若干。

二、怎樣解決蒸餾水和基本藥品

培養(yǎng)基的用水在一般人的心目總是覺的十分重要的，其實是多余的擔心。冷開水、清潔的河水都是給以用的，并不影響培養(yǎng)的效果。市場上出售的純凈水更是一般培養(yǎng)基理想的用水。最常用、最必要、用量最大的只需購買以下幾種就行了。

1、MS培養(yǎng)基的大量元素（家庭或所謂袖珍組培室的培養(yǎng)一般采用MS基就可以了。）共5種。也可以買市售的MS培養(yǎng)基

（1）、硝酸銨

（2）、硝酸鉀

（3）、 氯化鈣

（4）、硝酸鎂

（5）、磷酸二氫鉀

2、酒精

3、精密試紙（PH 5.4－7.0）

4、漂白粉或漂白精

5、瓊脂

6、白糖

7、福爾馬林

8、高錳酸鉀（可以到醫(yī)院或藥材商店去買）

9、微量元素、鐵鹽、維生素類以及激素類藥品應用量極少。比如一些激素、維生素類的藥品及有針劑也有片劑，他們都有比較準確的含量，你可以去按你的需要去配制比例。

愛好者在家庭環(huán)境下進行組織培養(yǎng)的探討與建議植物組織培養(yǎng)技術(shù)，尤其是快速繁殖，并非只有專業(yè)人員和專業(yè)實驗室才能夠完成的。作為對多肉植物和組織培養(yǎng)有著濃厚興趣的愛好者，在充分利用家庭條件的基礎(chǔ)上，同樣可以制備出自己的試管苗來的。在我們進行多肉植物的栽培中認識到，一些比較名貴的園藝品種，比如：萬象、玉扇、壽、高紋鷹爪等十二卷屬品種，還是繽紛橄欖、何魯牽牛等塊莖類植物，甚至于星球?qū)?、巖牡丹屬等等，這些植物的常規(guī)繁殖系數(shù)很低，他們都可以采用組織培養(yǎng)來解決其繁殖問題，并且可以得到相當數(shù)量的幼苗。對于奇想天外等種子萌發(fā)困難的植物，同樣可以借助組織培養(yǎng)來進行無菌播種。在進行組織培養(yǎng)過程中，不但可以對培養(yǎng)的植物有更深一層的認識，對常規(guī)的栽培有著相當大的意義。許多搞組織培養(yǎng)的專家，最初都不是專業(yè)學組培的，就是憑著興趣和探索精神取得輝煌成績的。關(guān)鍵是，愛好者有著濃厚的興趣，非凡的觀察力和細致入微的操作，這些都可以彌補非專業(yè)的缺陷，并且可以充分利用日常生活中的各種可利用資源，這些就足以讓愛好者在家庭環(huán)境下完成組織培養(yǎng)了。同時這也不僅僅滿足了自己的興趣，還可以有一定的經(jīng)濟收益，甚至可以有所創(chuàng)新和發(fā)明。

一、如何解決場地和基本設(shè)備：

進行組織培養(yǎng)，沒有一定的設(shè)備是無法開展的。正規(guī)實驗室的組織培養(yǎng)設(shè)備是昂貴的，不適合家庭消費，但如果能有途徑買到廉價的實驗室設(shè)備，那就在好不過了。如果沒有辦法搞到實驗室設(shè)備，就不妨動手自己制作一些簡單的設(shè)備。

1.無菌操作的主要設(shè)備――接種箱和壓力鍋：

接種箱：植物組織培養(yǎng)的主題操作需要在一個相對密閉的無菌環(huán)境中進行。那么說我們首先要創(chuàng)造一個密閉的環(huán)境，可以利用一些木料、塑料板、有機玻璃、鋁合金骨架等等廉價的材料，動手粘合一個小巧的接種箱。具體的參數(shù)可以找一本“食用菌栽培”的書籍，模仿種蘑菇的接種箱做一個即可。需要注意的是，組織培養(yǎng)的接種箱的密閉性要求比較高，盡量避免腐朽的木材和易生銹的材料，箱子的頂端按放兩盞燈：20w的紫外線燈和20w的日光燈。箱體的周邊盡量采用玻璃材料，因為這樣便于觀察，有時候接種箱還可以借用為培養(yǎng)箱，周邊采用玻璃材料更方便于觀察和培養(yǎng)。

高壓鍋：主要用來對培養(yǎng)基和其他材料的滅菌。在實驗室通常使用醫(yī)用高壓滅菌器，然而在家庭要充分利用廚房使用的高壓鍋，高壓鍋的壓力要低于滅菌器，但是適當延長滅菌時間，還是可以取得較好的效果的。比如：對培養(yǎng)基滅菌40分鐘就基本上可以達到滅菌效果（滅菌器是20分鐘）；無菌水采用間歇滅菌法，先用高壓鍋壓40分鐘，放置24小時，再壓20分鐘即可達到效果。

2.場地：

這個就因人而易了，總體的要求就是進行組織培養(yǎng)操作的地方要盡量無塵，減少空氣流動，最好有一定的陽光。比如書房、寫字間都可以用來進行無菌操作。

進行培養(yǎng)基的配制可以借用一下廚房，但所使用的器具必須和廚具分開。一般說，組織培養(yǎng)中的幾乎全部化學物質(zhì)對人體是無害的，除了少數(shù)激素類物質(zhì)和滅菌劑。對于有毒害的物質(zhì)，需要認真保管，以免發(fā)生危險。

3.輔助設(shè)備：

主要指冰箱，它是用來儲存化學物質(zhì)和培養(yǎng)基的。天平，可以采用感量在100克的托盤天平，甚至用中藥的藥衡都可以代替。培養(yǎng)架，這個就更簡單了，采用鋁合金-玻璃的培養(yǎng)箱既可以滿足要求，如果日光不足，可配合日光燈補光等。

4.化學試劑：

化學試劑是不可缺少的，因為組織培養(yǎng)的核心就是培養(yǎng)基的成分，而并不是簡單的無菌操作。一些用量較大的化學物質(zhì)是有必要買的，比如大量元素（硝酸銨、硝酸鉀、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鈣等）、高錳酸鉀、甲醛、酒精、白砂糖、瓊脂等等。微量元素和有機復合物不需要購買，因為它們的用量很小，我們可以用蔬菜浸汁或者馬鈴薯浸汁來代替。激素是必不可少的，他們的稱量需要借助分析天平，但這是家庭條件所不允許的，如果有條件可以借助關(guān)系單位代替配成母液，每次取一些使用即可。最好的辦法是到農(nóng)資商店（賣農(nóng)藥化肥的地方），它們一般出售農(nóng)業(yè)用的激素，有的是用安瓿裝的，按照一定的比例加入到培養(yǎng)基當中即可。近幾年來，有些化學品公司開始生產(chǎn)植物組織培養(yǎng)基原粉，只需要稱取一定量加水即可，很方便。比如泛生化學品公司生產(chǎn)的ms原粉，只需要稱量40克，加1升水，用微波爐加熱5分鐘即可分裝，相當簡便。

消毒劑通常采用氯化汞（劇毒），如果不容易搞到，可以用漂白粉代替。

調(diào)節(jié)酸堿度時，可以采用家庭常用的純堿和白醋。

5.培養(yǎng)容器和玻璃儀器：

組織培養(yǎng)的容器要求并不高，只要玻璃顏色為透明色即可（鈉玻璃不可以）。

我們可以到垃圾站去看看，撿回一些廢舊的果醬瓶就可以了。比較好用的是阿香婆辣醬瓶，我們實驗室也是采用的這種瓶子。瓶子的封口膜采用聚丙烯塑料即可，如果不好找到，可以采用微波爐專用的錫箔紙甚至方便面的袋子，折疊成雙層，用橡皮圈固定即可。

其它玻璃儀器，比如燒杯、玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替；一些度量儀器，如量筒和移液管最好到玻璃儀器商店購買，恐怕花不了20元錢就可以配置一套相當棒的組培玻璃儀器。

6.其它：

還有一些用品是必需的。比如精密ph試紙（5.4~7.0），需要買一本，大約花1.5元即可搞定；酒精燈也不需要買，用墨水瓶配上一個玻璃環(huán)，再加上一個棉花芯，最后用農(nóng)夫山泉礦泉水的瓶蓋做燈冒，這樣的酒精燈很小巧，適合接種箱使用。刀子剪子鑷子是必需的，到花市的工具攤位上，花10元錢全部搞定，注意選比較小巧的工具。

關(guān)于用水，按理說應該使用蒸餾水，但是我們家庭飲用的純凈水比蒸餾水還要純，那么說借用一些飲用水就可以了。我們曾經(jīng)采用康師傅純凈水進行動物細胞的培養(yǎng)，效果都是很不錯的，更何況于植物細胞培養(yǎng)了。

以上是組織培養(yǎng)的基本設(shè)備和試劑，主要突出了他們相關(guān)的替代品，因為作為組織培養(yǎng)中的快速繁殖，它的要求是相當?shù)偷?。我們的家庭培養(yǎng)和工廠化是不同的，工廠化生產(chǎn)組培苗要追求高增殖率，所以它的要求就比較精細和標準。我們的家庭培養(yǎng)則不需要那么準確，只要達到培養(yǎng)成功的目的即可。當然，如果想提高增殖倍率和試管苗的品質(zhì)，必須盡量貼近實驗室的用具和器材，代用品總是有一定的缺陷的。

（一）必須的設(shè)施物品及代用品

1、代用品

家庭用的電冰箱，可用于貯存培養(yǎng)基母液（4℃）及需低溫貯存的藥品（如生物調(diào)節(jié)劑）。

高壓鍋：它可用于培養(yǎng)基、無菌水、玻璃器皿及其他組培用具的消毒滅菌。如所用水硬度大可用涼白開水，進行消毒滅菌。避免被消毒滅菌物品表面結(jié)垢。

不銹鋼鍋或鋁鍋：它可用于培養(yǎng)基、溶化瓊脂（起水浴鍋作用）及組培用具消毒滅菌。

刷凈的廢棄食油桶：它可以用來貯存蒸餾水。

小白瓷碟：可以用于接種及盛放消毒液（若放消毒液，就不要再食用，以免中毒）。

日光燈：它可用于組培過程中光源補充。

洗凈廢棄的罐頭瓶：它可以用于組培培養(yǎng)之用，代替錐形瓶、試管。

組培場地可在自己的房間內(nèi)進行。在配制培養(yǎng)基和接種時，不要趕在家庭成員較多時進行，如室內(nèi)已安裝了空調(diào)，那么在初代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)、乃至小苗過渡時均有好處。

2、自制用具

（1）接種箱的制作：組培過程中的超凈工作臺是很貴重的設(shè)備。如果我們用自制的接種箱來代替，就可以大大節(jié)省開支，有利于普及。

自制的接種箱的用料，可以是膠合板、纖維板、玻璃（3毫米厚）、木條（裝修房屋用的龍骨），甚至可以用使紙板的包裝箱（包裝箱的質(zhì)量要稍好一些的，如電視機的包裝箱），也可以用有機玻璃。

其接種箱的大小，可以根據(jù)各自的家庭條件制作。制作太小不便于操作，但相對來說消毒容易，且占地較少；制作較大的便于操作，但消毒工作顯得不易，且占地面積較多。一般來說作成70厘米長、45厘米寬。50厘米高較為合適。

（2）培養(yǎng)箱的制作：培養(yǎng)箱可代替培養(yǎng)室，也可以用于過渡苗使用。它可以用玻璃制作，或利用長方形魚缸。因此，可用玻璃粘結(jié)制作。其大小可按自己家庭居室面積和組培的量來決定。

3、需購置用具

普通天平（500克）：用于稱量配制培養(yǎng)基藥品，或用稱量金銀、中藥的戥子稱，用于稱量配制培養(yǎng)基藥品、微量元素及生物調(diào)節(jié)劑；或購買微量元素及生物調(diào)節(jié)劑時，買已分裝的。酒精燈1盞：用于接種時，灼燒消毒滅菌。漏斗（亦可用購買桶裝食用油，所配給的漏斗）：用于分裝培養(yǎng)基用。長鑷子2把：用于接種。解剖刀2把、刀片若干：用于接種。10、50、100毫升量筒各1個：用于配制培養(yǎng)基用。長把牛角勺2把：用于配制培養(yǎng)基取藥品。1、2、5毫升移液管各1個：用于配制培養(yǎng)基用。

耐高溫塑料膜或牛皮紙：用于包扎培養(yǎng)瓶口及表糊自制接種箱內(nèi)部棱角處。橡膠圈：用于綁扎培養(yǎng)瓶口。脫脂棉：用于操作人員及組培用具酒精棉球消毒。pH(5～7）試紙1本：用時可剪成小條檢測培養(yǎng)基pH值。酒精1瓶：用于酒精燈及消毒。漂白粉1瓶：用于消毒。福爾馬林1瓶：用于接種箱消毒（在每次操作前2～10小時，將10～20毫升福爾馬林倒入小白瓷碟內(nèi)，在操作前取出）。MS培養(yǎng)基所需藥品；用于配制培養(yǎng)基。鹽酸及氫氧化鈉：用于調(diào)pH值。如若購置1盞紫外燈，進行室內(nèi)及接種箱消毒更為理想。

（二）操作時注意事項

家庭操作與單位不同，因而要注意以下事項：要注意安全，妥善保管藥品。特別對老人和小孩；操作時要消毒仔細嚴格，接種時操作人員戴好口罩、工作帽，避開電風扇及大風沙天氣，家庭成員多時避免操作；消毒前后避免家庭所養(yǎng)寵物進人工作間；藥品稱量要準確無誤；如果家庭不具備溫度調(diào)控（如調(diào)溫空調(diào)），應避免在盛夏、寒冬進行；紅掌組培要一步步來作，可先作容易組培的花卉，待取得經(jīng)驗后再做難作的花卉。

1.培養(yǎng)容器和玻璃儀器的準備：

進行培養(yǎng)基的配制首先要準備好培養(yǎng)瓶和配制使用的玻璃儀器。培養(yǎng)瓶一般使用各種果醬瓶，要先用洗潔精浸泡瓶子4~8小時，再用流水沖洗數(shù)次。其他的玻璃儀器同樣需要這樣清潔，直到玻璃壁上不掛水珠而是成為水膜為止。清洗完畢的玻璃容器要倒扣，空去瓶內(nèi)的水。

清洗干凈的容器要注意防塵，盡量放置在玻璃柜中。更簡單的是用干凈的毛巾將容器蓋住。

移液管要用吸球來清洗，反復用蒸餾水吹吸直到潔凈為止，將移液管放置在一個長筒中，便于使用。一般移液管只能使用一次，即要清洗，所以有多必要準備幾只移液管，建議：10ml/2支，5ml/2支，1ml/5支。

2.培養(yǎng)基的配制：

經(jīng)典的組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基是ms配方，其基本上劃分為：大量元素、微量元素、鐵鹽、有機復合物、植物激素、糖和支持物。這些成分的用量都在毫克級，用普通天平是難以稱量的，為了解決這個問題，我們可以按比例放大各成分的用量配制成母液，使用的時候按一定比例加入即可。

下面將一種ms培養(yǎng)基的母液配制方案公布如下：

大量元素：硝酸銨66.0克；

硝酸鉀76.0克；

無水氯化鈣13.3克；

七水硫酸鎂14.8克；

磷酸二氫鉀6.8克。

以上分別溶解后合并定容到1升，每配制1升標準ms培養(yǎng)基取25毫升。

鐵鹽：七水硫酸亞鐵5.56克；

乙二胺四乙酸二鈉（edtana）7.46克。

以上兩種分別加熱溶解，混合，定容到1升，調(diào)整ph到5.5以下，每配制一升ms取5毫升。

微量元素和有機復合物的用量過于微小，為了簡便我們可以用蔬菜提取液或者馬鈴薯提取液代替。通常我們習慣用100克菠菜加100ml的水煮沸10分鐘，過濾留濾液，每配制1升ms培養(yǎng)基加入20~50毫升提取液。同樣也可以使用帶皮馬鈴薯100克加200毫升水煮沸15分鐘，過濾留濾液，每升ms加入50~100毫升即可。

加入上述各組分后，每升ms培養(yǎng)基還需要加入白砂糖30克，瓊脂7克。

這里要說明的是，糖和瓊脂都是可變的量，要根據(jù)需要調(diào)整。另外制作果凍用的卡拉膠也可以代替瓊脂，透明度更好。

上述各成分加入后，定容到800毫升左右，用微波爐加熱，直到瓊脂全部溶解為止。此時加入所需的植物激素（通常配制成0.1%溶液，這樣每取1毫升，換算到培養(yǎng)基中就是1ppm）。然后加水定容到1100毫升（1.1升），之所以多出0.1升是為了抵消分裝和消毒中的損耗。最后用酸堿調(diào)整ph到5.8~6.0。

3.使用ms原粉配制培養(yǎng)基：

目前國內(nèi)的一些化學品公司開發(fā)了簡便的ms培養(yǎng)基原粉，大大簡便了培養(yǎng)基的配制，根據(jù)不同公司的說明選擇培養(yǎng)基的種類。下面就以ms原粉為例： ms培養(yǎng)基原粉，包括了大量元素、微量元素、鐵鹽、有機復合物、糖和瓊脂，一般按使用方法稱量，微波爐加熱溶解，加入激素，定容到1100毫升（1.1升），調(diào)整ph值到5.8~6.0。

4.分裝：

將配制好的培養(yǎng)基分裝在培養(yǎng)容器中，注意要趁熱分裝，因為瓊脂在40度以下就會凝固。每個培養(yǎng)瓶裝培養(yǎng)基大約是瓶容積的1/6~1/5，注意不要將培養(yǎng)基掛在瓶的外壁，這樣容易造成污染。分裝后用聚丙烯薄膜或著方便面的袋子封口，用膠圈固定（膠圈盡量選擇自行車的內(nèi)胎，這種膠圈比較耐熱）。

5. 滅菌：

采用家庭壓力鍋消毒，建議到醫(yī)療器械用品商店買一些“滅菌效果試紙”，它們可以指示滅菌效果，當滅菌達到效果時會變色。把試紙和培養(yǎng)基同時放入鍋內(nèi)，加熱到有大量蒸汽冒出，再加上壓力伐，維持小火30~40分鐘。

滅菌完畢后自然冷卻，將培養(yǎng)基取出，放在陰涼無塵處備用。

6. 接種箱的準備：

新制作的接種箱必須要清潔干凈，盡量做到無死角。每次使用前2小時，將操作所需要的全部物品放入接種箱，再用一個小燒杯加入3~5克高錳酸鉀放入接種箱內(nèi)，在箱內(nèi)向燒杯中倒入2~3毫升的甲醛溶液，大約幾秒鐘后會看到甲醛蒸汽出現(xiàn)，這樣可以對接種箱內(nèi)的所有物品進行初次消毒；同時打開紫外線燈照射。紫外線燈是高電壓穿激汞蒸汽產(chǎn)生的，紫外線進行第二道滅菌，在紫外線照射大約15分鐘后，會激發(fā)氧氣形成臭氧，臭氧作為第三道滅菌防線，這樣經(jīng)過三次滅菌，接種箱基本上可以達到無菌標準。

在操作前15分鐘內(nèi)，向剛才蒸發(fā)甲醛用的燒杯中倒入5毫升濃氨水，因為甲醛對人體有毒害作用，氨水可以和甲醛形成一種叫做“六亞甲基四胺”的固體物質(zhì)，從而中和了甲醛的刺激性蒸汽。這個時候紫外燈不要關(guān)掉，要繼續(xù)照射，直到操作前5分鐘關(guān)閉，維持黑暗5分鐘，然后再打開日光燈進行操作。維持5分鐘黑暗的原因是，紫外光對微生物的殺滅是作用于dna的胸腺嘧啶，形成四聚體，但是微生物具有一種光復活蛋白，可以在有可見光的環(huán)境下還原胸腺四聚體，而使微生物復活，這個作用叫做“光復活作用”，所以在關(guān)掉紫外燈后必須維持黑暗幾分鐘，避免光復活作用的出現(xiàn)。

怎樣在家庭開展組培工作

制備

家庭組培因受到條件的限制，不可能配置大量的配養(yǎng)基，，一般每次配置1升為宜。煮制后用PH試紙測定后，分裝成35－40瓶，塞好棉塞，包好包頭紙。（棉塞一定要用作棉衣的棉花卷制，不能使用脫脂棉，然后用紗布包緊，用棉線扎好。棉塞的松緊以手提棉塞瓶子不滑落為宜。）然后放入高壓鍋里高壓滅菌，待高壓鍋噴嘴噴出蒸汽時，扣上壓力閥，從壓力閥噴氣時起計時，連續(xù)維持15－20分鐘后關(guān)火，壓力消失后，打開鍋蓋，取出配養(yǎng)基，放入接種箱內(nèi)待用。初次實驗時，滅菌后的培養(yǎng)基應放置三五天后，觀察無霉菌生長時才能使用。如有霉菌長出，這說明滅菌時間不夠，，需要適當增加滅菌時間。

接種

將滅菌后的配養(yǎng)基、無菌水、消毒藥水及使用的器材放入接種箱內(nèi)，因接種箱內(nèi)的體積相對較小，所以所用的一切物品都要有序地擺放在相應的位置上，不能隨意擺放，箱內(nèi)濕度較大，點酒精燈一定要是用打火機，不要使用火柴。要特別注意準備好裝污水、污物的容器，盡可能地大一些，因為操作時是不容許開箱取物的。把所有的物品放置好以后，將一裝有10－20ml福爾馬林的磁杯放入箱內(nèi)（最好不要使用玻璃杯，因反應時溫度較高，容易炸裂。），倒入2－5g高錳酸鉀（PP粉），使其蒸氣充滿箱內(nèi)，達到滅菌的效果。這時要將接種箱的通氣孔和操作孔封閉好，避免甲醛蒸氣很快散盡。待箱內(nèi)蒸氣散盡后，才能開始接種工作，這段時間大約需要5－10個小時。

接種時，揭去密封在接種箱通氣孔和操作孔上的密封物，取出熏蒸用的磁杯，將接種用的材料送入接種箱內(nèi)，開啟紫外線燈，十五分鐘后關(guān)閉紫外線燈，開啟照明燈，即可開始工作。操作時一定要樹立無菌觀念，要把一切物品都看成是帶菌的，要時時都注意防范。工作是由于箱內(nèi)溫度較高，濕度較大，手容易出汗，所以每接種一瓶后都要用酒精擦拭手指，也可以戴指套。另外，操作時要注意防火，由于空間較小，一不小心就容易燒傷手指或引起酒精起火。打開瓶塞時，要將瓶口置于酒精燈上方，用右手的無名指和小指夾住棉塞尾，輕輕將棉塞拔出，棉塞不能置于箱內(nèi)物品上，應用手指夾住，接種后，將瓶口在酒精燈上燒灼一下，棉塞也燒灼一下，，然后在酒精燈火焰上方輕輕塞好，扎好包頭紙，用鉛筆標明品種、接種日期、編號等，然后重復下一瓶。

其實，用接種箱接種與超凈工作臺相比較，工作時人要感覺舒適得多。污染率也是很低的，操作熟練后幾乎沒有什么污染發(fā)生。接種后愈傷組織分化、小苗分化、生長狀態(tài)與在超凈臺上接種的沒有什么兩樣。

培養(yǎng)

在家庭的業(yè)余條件下培養(yǎng)培養(yǎng)的條件不可能得到?？兀砸浞值睦米匀粭l件，接種后的培養(yǎng)瓶可以放在有較強散射光的地方，如靠窗的書柜、寫字臺上，但要避免日光直射，一般室溫在22－28攝氏度時都能正常生長，不是特殊的品種不需要特殊的護理。如室溫太低，可以用紙板、木條、塑料薄膜做一個簡單的培養(yǎng)箱，里面裝一兩個15－25瓦的白織燈，既可以補助光照也可以提高培養(yǎng)的溫度。夏天溫度過高時，有條件的可以擺放在空調(diào)室內(nèi)，，沒有空調(diào)室的，降溫雖然困難一些，但大多數(shù)試管苗是可以耐受的，不至于死去。小苗長出后，擺放在書柜或工作臺上，感到自己培養(yǎng)出來的生機勃勃的小生靈，無疑是一種享受。

栽培

當小苗長到一定的時候，就可以配置一些生根配養(yǎng)基將小苗轉(zhuǎn)移培養(yǎng)生根，待長出一定根系時，就可以出瓶種植了。小苗出瓶種植的時候一定要注意以下幾個方面，一是要適當降低溫度；二是要增大濕度；三是要嚴格控制雜菌危害；四是要保證種植介質(zhì)的疏松透氣；五是要保證適當?shù)墓庹?。我通常是用跖石、木屑、稻谷殼混合作基質(zhì)，把小苗種植后用百菌清噴霧澆根，蓋上塑料薄膜，少量的小苗干脆用玻璃杯蓋住，大約15天后就能揭去覆蓋物，便可進行正常管理了。

家庭開展組培其實也并不是一件什么很困難的事情，只要多開動腦筋，多想一些辦法，做起來也是很容易地。萬事開頭難，辦法總比困難多。我1974年在一個縣烤煙研究所里當所長，原來條件不允許，科研經(jīng)費很緊張，剛開始的時候，一年的科研經(jīng)費只有3000元，那年我做過煙草的花藥單倍體、水稻花藥培養(yǎng)、柑桔胚乳培養(yǎng)、黑皮果蔗莖尖組織培養(yǎng)、田三七愈傷組織培養(yǎng)、黑節(jié)草（石斛）種子的無菌培養(yǎng)、體細胞融合，都獲得了很好的成績，我們就是用這種方法做的，當時北京、上海很多的研究單位來看了很吃驚，他們認為很珍貴的組培小苗，被我們丟得到處都是，覺的不可思議，他們做不出來的，竟然在我們一個十分閉塞的山區(qū)里可以做出來。我說這個話的意思不是為自己吹噓擺功，而是告訴想從事這個行業(yè)的朋友，不要自己把自己的能量看得太低，也不要迷信權(quán)威、只要自己有信心，嚴格地按照科學的規(guī)律去做，沒有什么做不了的，沒有什么辦不到的。

家庭組培培養(yǎng)基的選擇與效果評價

選擇合適的培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)成功的基礎(chǔ)。

選擇合適的培養(yǎng)基主要從以下兩個方面考慮：一是基本培養(yǎng)基；二是各種激素的濃度及相對比例。

MS培養(yǎng)基適合于大多數(shù)雙子葉植物，B5和N6培養(yǎng)基適合與許多單子葉植物，特別是N6培養(yǎng)基對禾本科植物小麥、水稻等很有效，White培養(yǎng)基適合于根的培養(yǎng)。

首先試用這些培養(yǎng)基進行初步實驗，可以少走彎路，大大；減少時間、人力和物力的消耗。當通過一系列初試之后，可再根據(jù)實際情況對其中的某些成分做小范圍調(diào)整。

在進行調(diào)整時，以下情況可供參考。一是當用一種化合物作為氮源時，硝酸鹽的作用比銨鹽好，但單獨使用硝酸鹽會使培養(yǎng)基的PH向堿性方向漂移，若同時加入硝酸鹽和少量銨鹽，會使這種漂移得到克服。二是當某些元素供應不足時，培養(yǎng)的植物會表現(xiàn)出一些癥狀，可根據(jù)癥狀加以調(diào)整，如氮不足時，培養(yǎng)的組織常表現(xiàn)出花色苷的顏色（紅、紫紅色），愈傷組織內(nèi)部很難看到導管分子的分化；當?shù)?、鉀或磷不足時，細胞會明顯過度生長，形成一些十分蓬松，甚至呈透明狀的愈傷組織；鐵、硫缺少時組織會失綠，細胞分裂停滯，愈傷組織出現(xiàn)褐色衰老癥狀；缺硼時細胞分裂趨勢緩慢，過度伸長；缺少錳或鉬時細胞生長受到影響。

培養(yǎng)基外源激素的作用也會使培養(yǎng)物出現(xiàn)上述一些類似的情況，所以應仔細分析，不可輕易下結(jié)論。